Hoe een genenpistool te gebruiken

1. Materiaalvoorbereiding

Een dunne laag medium werd op een kweekschotel van 9 cm2 geplaatst en het materiaal (gewoonlijk onrijpe embryo's, rijpe embryo's, kleine callus, suspensiecellen, protoplasten, enz.) Werd in het midden van de schaal met een diameter van 3 cm uitgeplaat. .

2, de behandeling van goudpoeder

Neem 60 mg goudpoeder of wolfraampoeder in een centrifugebuis, voeg 1 ml absolute ethanol toe, schud goed gedurende 3 minuten, centrifugeer voor 1rain bij 9615 g, verwijder de bovenstaande vloeistof, voeg 1 ml steriel water toe en meng goed, centrifugeer bij 9615 g, herhaal stap 3 hierboven. Times. Uiteindelijk werd het goudpoeder gesuspendeerd in 1 ml steriel gedestilleerd water en bewaard bij 4 ° C of bij kamertemperatuur.

3, DNA-verwerking

Neem 50tA goudpoedersuspensie, voeg 5de plasmide-DNA (1,0 / lg ~ 1) -oplossing, 50 // l toe

0,1 mol / L spermidine (de gebruikte oplossing werd steriel gesteriliseerd), gedurende 3 minuten geschud, bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten gelaten, gedurende 10 s bij 9615 g gecentrifugeerd, de supernatant weggegooid; voeg 250 ~ 1 absolute ethanol toe, schud aan centrifuge bij 9615 g gedurende 10 sec en gooi de supernatant weg. De pellet werd geresuspendeerd in 60/1 1 absolute ethanol en gebruikt voor 5 schoten (10 tot 1 per shot).

4, de werking van het genenpistool

Alle operaties van het genenpistool worden uitgevoerd onder aseptische omstandigheden, als volgt:

1) Desinfecteer het oppervlak van het genpistool en de monsterkamer met 70% ethanol. Tegelijkertijd werden het barrièrenet en de te splitsen schijf, de micro-elastische drager, de houder en het fixeerwerktuig gedurende 15 minuten gedrenkt met 70% ethanol, en vervolgens op een schone bank geplaatst om te drogen. Het splijtbare diafragma, het vaste omhulsel en de micro-elastische drager-lanceringsinrichting kunnen aan het oppervlak worden gesteriliseerd met 70% ethanol en worden drooggeblazen.

2) Plaats de microdeeltjesschuif in de borgring en voeg een mengsel van DNA en goudpoeder toe aan het midden van de microdeeltjesschuif en laat het ongeveer 1 minuut drogen.

3) Plaats het breekbare membraan op de houder en draai het met de klok mee op de gasversneller.

4) Installeer de afstandsring, het blokkeernet, de blokkeernethouder, de deeltjesdrager en de bevestigingsring (voorkant met de deeltjes naar beneden gericht), draai het deksel vast en steek het in de grijper.

5) Plaats het monster in de bombardementskamer en sluit de deur.

6) Open de hoofdklep van de heliumcilinder en draai de heliumregelklep met de klok mee zodat de indicatie van de manometeraanwijzer hoger is dan de membraanspanning 200Psi (= 1,379 MPa).

7) Schakel de genenpistool en transformatorschakelaar in.

8) Druk op de vacuümknop. Als het vacuüm 26-28 inch Hg is (= 88.05 ~ 94.82kPa), druk dan snel op de Hold-knop, houd vervolgens de startknop ingedrukt en houd deze ingedrukt totdat deze is geactiveerd.

9) Druk op de ontluchtingssleutel om het monster te resetten nadat de vacuümtabel op nul is gesteld.

10) Afsluiten.

Draai de hoofdschakelaar van de heliumcilinder vast, druk op een leeg pistool, plaats de wijzer van de manometer op nul en draai het drukregelventiel tegen de wijzers van de klok in; zet de hoofdschakelaar van het genenpistool en de transformatorschakelaar uit.